你知道多肽標記及修飾作用么?不知道也沒關系,今天就讓我們一起來了解一下吧。
目前多肽標記及修飾的內容非常多,廣泛應用在多肽藥物,多肽生物學,多肽抗體以及多肽試劑的研究中。目前應用廣泛的有:非放射性核素標記(C13,H2),熒光標記(FAM,F(xiàn)ITC),生物素標記,磷酸化修飾等。
1、非放射性核素標記
目前在非放射性核素標記中,使用廣泛的仍然是C13,H2,因為其使用安全,放射性小?,F(xiàn)在有比較*的非放射性標記的氨基酸,可以按照正常的多肽合成方法將標記好的氨基酸直接連接到多肽上。
2、熒光標記
熒光標記由于沒有放射性,實驗操作簡單。因此,目前在生物學研究中熒光標記應用非常廣泛,熒光標記方法與熒光試劑的結構有關系,對于有游離羧基的采用的方法與接肽反應相同,也采用HBTU/HOBt/DIEA方法連接。但是對于FITC標記,需要在連接FITC前,增加一個氨基己酸,避免在切割的過程中被TFA切割掉。
3、生物素標記
生物素-親合素系統(tǒng) (biotin-avidin system,BAS),是70年代后期應用于免疫學,并得到迅速發(fā)展的一種新型生物反應放大系統(tǒng)。
由于它具有生物素與親合素之間高度親和力及多級放大效應,并與熒光素、酶、同位素等免疫標記技術有機地結合,使各種示蹤免疫分析的特異性和靈敏度進一步提高。
主要有用于標記多肽氨基的生物素N-羥基丁二酰亞胺酯(BNHS)和生物素對硝基酚酯(pBNP),其中以BNHS常用,當然,也可以直接使用生物素也可以標記,因為其結構上有個游離的羧基,采用HBTU/HOBt/DIEA方法縮合,由于生物素的溶解度低,使用DMSO/DMF的混合溶劑增加溶解度。